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PRM靶向蛋白質組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質/肽段進行相對(一定)定量。隨著質譜、系統生物學、生物信息學等相關學科的發(fā)展,我認為今后我們會更多地在現實生活中見到蛋白質組學相關的應用。如定量胰島素、鑒定血紅蛋白氨基酸突變(鐮刀形紅細胞癥)、糖化血紅蛋白比例測定等。從測試體量估計,應該遠小于1%的ELISA測試量。蛋白質組研究技術涉及到各種重要的生物學現象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。廣州新型修飾蛋白組學研究方法
蛋白質組學定義:蛋白質組學(proteomics),指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規(guī)模、系統化地研究,以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網絡。研究的內容主要包括:組成蛋白質一級結構氨基酸的序列特征、蛋白質的豐度、蛋白質活性、蛋白質的修飾、亞細胞定位和三維結構、蛋白質之間的相互作用以及對蛋白質的高階復合物結構。蛋白質組學的研究方法主要有:蛋白質雙向電泳、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)、質譜、生物信息學。廣州新型修飾蛋白組學研究方法蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
蛋白質組學技術方法:等電聚焦:等電聚焦(isoelectric focusing,IEF)是一種利用有pH梯度的介質分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。等電聚焦凝膠電泳依據蛋白質分子的靜電荷或等電點進行分離,等電聚焦中,蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸,在電場中形成正極為酸性,負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷,因此可以在電場中移動;當蛋白質遷移至其等電點位置時,其靜電荷數為零,在電場中不再移動,據此將蛋白質分離。
蛋白質組學技術發(fā)展方面:蛋白質組學的研究方法將出現多種技術并存,各有優(yōu)勢和局限的特點,而難以象基因組研究一樣形成比較一致的方法。除了發(fā)展新方法外,更強調各種方法間的整合和互補,以適應不同蛋白質的不同特征。另外,蛋白質組學與其它學科的交叉也將日益明顯和重要,這種交叉是新技術新方法的活水之源,特別是,蛋白質組學與其它大規(guī)??茖W如基因組學,生物信息學等領域的交叉,構成組學(omics)生物技術研究方法,所呈現出的系統生物學(System Biology)研究模式,將成為未來生命科學比較令人激動的新前沿。蛋白質組學的研究方法主要有:蛋白質雙向電泳、氨基酸序列測定(包括N端測序和C端測序)、生物信息學。
蛋白質學組翻譯后修飾的研究策略:自中而下:自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法,分析組蛋白時其原理類似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時,通常需要將被檢測蛋白質消化成3-9kDa范圍內的肽段,因此也無法保證檢測到的肽段的完整性。但是,由于儀器的進步和保留了組蛋白尾部的組合修飾,自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下:自上而下技術可以直接對完整的蛋白質進行測序,包括翻譯后修飾的蛋白質和其他大的蛋白質片段,而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關的信息,使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域。廣州新型修飾蛋白組學研究方法
Label free定量蛋白組學技術是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析。廣州新型修飾蛋白組學研究方法
蛋白質組學常用技術:非靶向蛋白組學:蛋白質定性(膠條鑒定和溶液鑒定),高通量定量蛋白組(Labelfree、iTRAQ/TMT和DIA定量),多肽組學。蛋白質組研究技術在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。蛋白質組學主要以全蛋白組(組織、細胞)、線粒體蛋白組、葉綠體蛋白組和外泌體蛋白組為研究對象,通過對蛋白組進行定性、定量、分子功能分析、通路互作分析和蛋白互作分析,揭示生物學功能、作用機制、疾病診斷的標志物以及預測蛋白的上、下游變化關系。蛋白質組學可以克服核酸水平預測的不確定性、反映核酸翻譯后修飾情況。廣州新型修飾蛋白組學研究方法
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