重組蛋白具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和科研價(jià)值，但是在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中使用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法將會(huì)消耗大量的時(shí)間，而傳統(tǒng)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法，在產(chǎn)量上也難以令人滿意。所以重組蛋白大規(guī)模的瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)是近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)，已有報(bào)道能放大到 100L反應(yīng)器中生產(chǎn)重組蛋白，產(chǎn)量（分泌型蛋白）可達(dá) 1-10mg/L。不過該方法技術(shù)條件要求高，如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中，重組蛋白的表達(dá)水平與許多 因素相關(guān)，如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn) 定性、基因在染色體上的整合位點(diǎn)、重組蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性作 用以及宿主細(xì)胞的遺傳特性等。怎么才能讓重組蛋白保持良好的穩(wěn)定性和生物學(xué)活性呢？GMP級(jí)LIF重組蛋白定制

在昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中，昆蟲細(xì)胞需要桿狀病毒作為重組蛋白表達(dá)的中間體。桿狀病毒是一組不同的DNA病毒，能夠侵染各種昆蟲細(xì)胞。它們就像一個(gè)穿梭機(jī)，將目標(biāo)基因?qū)虢o定的宿主細(xì)胞。加州親筆多核多角體病毒(AcMNPV) 在利用桿狀病毒這方面表現(xiàn)出突出的特征。簡(jiǎn)單地說，將編碼感興趣蛋白質(zhì)的基因插入一個(gè)主要載體，然后將其克隆到一個(gè)名為Bacmid的次要載體上。Bacmid被轉(zhuǎn)移到一株細(xì)菌(通常是大腸桿菌)中進(jìn)行初步病毒生產(chǎn)和組裝，以獲得一代桿狀病毒(P1)。P1病毒在昆蟲細(xì)胞中被擴(kuò)增(例如sf9)以獲得合適的滴度(P2)，然后P2病毒被用于侵染相同或不同的昆蟲細(xì)胞系(例如High-five)以實(shí)現(xiàn)重組蛋白表達(dá)。GMP級(jí)LIF重組蛋白定制如何長(zhǎng)期保存重組蛋白？

如果說明書上沒有具體的說明，如何重溶（Reconstitute）凍干的重組蛋白？我們建議采用以下方式：（1）將試劑瓶和重溶緩沖液平衡至室溫。（2）短暫離心試劑瓶以確保在小瓶底部收集所有凍干物。（3）加入推薦的重溶緩沖液，達(dá)到產(chǎn)品說明上推薦的濃度。避免劇烈振蕩或移液器吹打，這可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。（4）使試劑瓶在室溫下重溶15-30分鐘，可使用360度搖床或手動(dòng)輕輕上下顛倒。（5）每管體積不小于10μL分裝，并按產(chǎn)品說明書上的指示儲(chǔ)存。（6）如果小瓶?jī)?nèi)呈現(xiàn)薄片或顆粒，則在室溫下將產(chǎn)品混合幾小時(shí)，然后在4℃過夜。

功能性ELISA是一類以ELISA形式進(jìn)行的、基于體外配體結(jié)合的分析法。該方法用于檢測(cè)目的蛋白與其天然結(jié)合物配體之間（如生長(zhǎng)因子與其受體）的結(jié)合能力。如果在該檢測(cè)中生長(zhǎng)因子能夠與其天然受體相結(jié)合，則該生長(zhǎng)因子很可能是具有功能的。ED50為OD值讀取過程中能夠提供50%信號(hào)強(qiáng)度的生長(zhǎng)因子濃度（在包被了受體的平板上）。重組蛋白使用了基于細(xì)胞的檢測(cè)分析或功能性ELISA分析對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了檢測(cè)，產(chǎn)品頁上會(huì)提供相應(yīng)的ED50值。也有些重組蛋白沒有提供生物活性數(shù)據(jù)。在大多數(shù)情況下,這表明沒有進(jìn)行生物活性測(cè)試，但它并不一定意味著蛋白是沒有活性的。在沒有生物活性數(shù)據(jù)的情況下，這些蛋白可用做蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，蛋白免疫印記陽性對(duì)照（如果是全長(zhǎng)的重組蛋白）或免疫原。其它可能的用途是配體結(jié)合試驗(yàn)或ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。45.蘇州近岸蛋白專注生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的重組蛋白質(zhì)。

昆蟲細(xì)胞是多種重組蛋白的多功能表達(dá)宿主。其較強(qiáng)的折疊能力和較高的培養(yǎng)密度使其成為表達(dá)細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜蛋白和病毒蛋白的理想選擇。2007年，由昆蟲細(xì)胞系以病毒樣顆粒(VLPs)的形式生產(chǎn)的病毒疫苗Cervarix被批準(zhǔn)用于人類。除了在疫苗開發(fā)方面的潛力外，昆蟲細(xì)胞產(chǎn)生的高活性蛋白還應(yīng)用于生物物理學(xué)和生物化學(xué)的各個(gè)學(xué)科，如結(jié)構(gòu)解釋、藥物設(shè)計(jì)、測(cè)定方法建立和診斷試劑開發(fā)等等。許多生物廠家利用昆蟲細(xì)胞進(jìn)行重組蛋白產(chǎn)品開發(fā)和承包研究項(xiàng)目。不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別？GMP級(jí)LIF重組蛋白定制

購(gòu)買的重組蛋白如何保存？GMP級(jí)LIF重組蛋白定制

在生物學(xué)研究和蛋白質(zhì)功能研究中，常用的方法之一是重組融合蛋白，簡(jiǎn)稱融合蛋白。重組融合蛋白是由兩個(gè)或兩個(gè)以上原為不同蛋白質(zhì)編碼的基因組合而成的。由融合基因翻譯而來的包含單個(gè)或多個(gè)多肽的重組融合蛋白獲得了來自每個(gè)原蛋白的功能特性。融合蛋白有三個(gè)重要的用途:幫助純化克隆基因，報(bào)告表達(dá)水平，作為組織化學(xué)標(biāo)簽，使蛋白質(zhì)在細(xì)胞、組織或有機(jī)體中的位置可視化。在重組蛋白純化中，重組融合蛋白法通常用于親和層析，在親和層析中，將易于純化的蛋白與研究人員希望研究的蛋白相連接。許多蛋白質(zhì)和多肽已被用作融合標(biāo)簽，包括谷胱甘肽- s -轉(zhuǎn)移酶(gst標(biāo)簽)、麥芽糖結(jié)合蛋白(mbp標(biāo)簽)、多組氨酸(his標(biāo)簽)、人類生長(zhǎng)因子、泛素和抗體表位。此外，β-半乳糖苷酶、熒光素酶和綠色熒光蛋白(GFP)通常作為部分蛋白表達(dá)和定位的報(bào)告因子。GMP級(jí)LIF重組蛋白定制

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